Stanovení čistoty HPLC

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) rozdělí složky vzorku tak, aby bylo možné odlišit hlavní látku od příbuzných látek, vedlejších produktů syntézy, zkrácených sekvencí a degradačních produktů. Výsledkem je objektivní kvantitativní obraz toho, jaký podíl vzorku tvoří deklarovaná látka.

Co se měří

Zkouška čistoty odpovídá na úzkou, ale důležitou otázku: jaký podíl ze všeho, co metoda ve vzorku dokáže detekovat, tvoří cílová látka? Uvádí se jako procento čistoty hlavního píku spolu s příbuznými látkami, které jej doprovázejí. Jde o hodnotu v plošných procentech a odráží to, co detektor vidí. Některé soli, protiionty nebo zbytková voda se do UV hodnoty čistoty promítnout nemusí.

Obvyklý postup

U peptidů se čistota běžně stanovuje reverzní kapalinovou chromatografií (RP-HPLC). Vzorek se nadávkuje na hydrofobní kolonu, prochází jí gradient voda/organické rozpouštědlo, složky se dělí podle toho, jak silně s kolonou interagují, a vystupují v různých retenčních časech. UV detektor, často s diodovým polem, každou z nich při eluci zaznamená a vzniká chromatogram.

Jak výsledek číst

Hlavní údaj, tedy plošná procenta hlavního píku, čtěte společně s chromatogramem a příbuznými látkami. Několik drobných nečistot vypovídá o něčem jiném než jeden velký souběžně eluující pík při stejné celkové čistotě. Čistota není totéž co identita, obsah nebo sterilita, to jsou samostatné a vzájemně se doplňující zkoušky.

Testování domluvíte přes zaslání vzorku.